อัลตราโซนิก Homogenizer

คำถามที่พบบ่อยเกี่ยวกับเซลล์ที่ถูกทำลาย http://www.scientzbio.com/

อะไรคือเงื่อนไขสำหรับ sonication ของ Streptomyces (actinomycetes)?

การวิเคราะห์: actinomycetes อยู่ใน (% mol%) ของกลุ่มย่อย Gram-positive (Eubacteria) บนต้นไม้ที่มีวิวัฒนาการของระบบ prokaryotic ซึ่งมีลักษณะทางโมเลกุลและทางชีวภาพที่ไม่ซ้ำกันกับ prokaryotes อย่างไรก็ตามในกลุ่มที่แตกต่างกันองค์ประกอบทางเคมีของผนังเซลล์แตกต่างกันไปอย่างมาก

ในอัลตราซาวด์ E. coli ใช้ 400W และวิธีการในการทำลาย 5s สำหรับ 5s มีประสิทธิภาพ แต่ใช้กับ Streptomyces และไม่มีผลใด ๆ เนื่องจากความแตกต่างขององค์ประกอบของผนังเซลล์ การรักษาก่อนการปั่นของ Streptomyces (actinomycetes) โดยทั่วไปมีการกำหนดค่าให้มีความเข้มข้นบางอย่างของการระงับเชื้อแบคทีเรีย เงื่อนไขเฉพาะสำหรับการบดโดยใช้เครื่องทำลายเซลล์ล้ำเสียงคือการเก็บเชื้อแบคทีเรียในสารละลายเพาะเลี้ยง 24 ชั่วโมงที่ 5 000 r / min เป็นเวลา 5 นาทีเพื่อรวบรวมเซลล์ ซักด้วย pH 7.5 Na2HPO-NaH2PO buffer 3 ครั้งและเซลล์ถูกจัดรูปแบบเป็น 1: 3 การระงับเชื้อแบคทีเรียโดยใช้บัฟเฟอร์ วางไว้ในหลอดทดลองขนาดใหญ่ 40 มล. วางหลอดทดสอบพลาสติกขนาดใหญ่ลงในอ่างแช่เย็นและบดด้วยตัวทำลายเซลล์ล้ำเสียง (กำลัง 200W, 1/2 "probe, crush 30s, 30s เป็นระยะ ๆ ), เครื่องบดที่ความเร็ว 12 000 รอบ / นาทีเครื่องปั่นแยกที่ความเร็วสูง 30 min เก็บเศษเซลล์และ supernatant ล้างเซลล์สามารถล้างครั้งเดียวกับน้ำเกลือที่เตรียมไว้ก่อนหรือ Tris-HCl ที่ pH 8 นอกจากนี้ปริมาณอัลตราโซนิคจะแตกต่างกันอย่างมากกับจำนวนตัวอย่างและแบคทีเรียกำลัง 400- 600w บดสำหรับ 5 วินาทีหยุดเป็นเวลา 5 วินาทีแช่แข็งและเพิ่มความเข้มข้นสุดท้ายของ PMSF 1 mM เพื่อหาค่าความเข้มและความถี่ที่เหมาะสมของอัลตราโซนิคจะต้องตรวจสอบว่าแบคทีเรียนั้นแตกหักหมดหรือไม่ตลอดเวลา