วิธีการใช้ปืนยีน

1. การเตรียมวัสดุ

วางสื่อขนาดเล็กบาง ๆ ลงบนจานเพาะเลี้ยงขนาด 9 ซม. 2 และวัสดุ (โดยปกติจะเป็นตัวอ่อนอ่อนตัวอ่อนที่โตเต็มที่แคลลัสขนาดเล็กเซลล์แขวนลอยโปรโตพลาสต์ ฯลฯ ) ถูกชุบในใจกลางของจานด้วยเส้นผ่าศูนย์กลาง 3 ซม. .

2 การรักษาผงทอง

ใช้ผงทองคำหรือผงทังสเตน 60 มก. ในหลอดปั่นเหวี่ยงเพิ่มเอทานอลสัมบูรณ์ 1 มล. เขย่าให้เข้ากัน 3 นาทีปั่นเหวี่ยง 1 นาทีที่ 9615g นำส่วนที่เหลือออกใส่น้ำที่ผ่านการฆ่าเชื้อ 1 มิลลิลิตรแล้วผสมให้เข้ากันหมุนเหวี่ยงที่ 9615g ไทม์ส ในที่สุดผงทองคำจะถูกแขวนอยู่ในน้ำกลั่นที่ผ่านการฆ่าเชื้อ 1 มิลลิลิตรและเก็บไว้ที่ 4 'C หรือที่อุณหภูมิห้อง

3 การประมวลผลดีเอ็นเอ

พักผงทอง 50tA เพิ่มดีเอ็นเอ plasmid 5rd (1.0 / lg ~ 1) สารละลาย 50 // l

0.1 mol / L spermidine (สารละลายที่ใช้ผ่านการฆ่าเชื้อแล้ว) เขย่าเป็นเวลา 3 นาทีปล่อยทิ้งไว้ที่อุณหภูมิห้องเป็นเวลา 10 นาทีปั่นเหวี่ยงที่ 9615 กรัมเป็นเวลา 10 วินาทีทิ้งส่วนที่เหลือ; เพิ่มเอทานอลสัมบูรณ์ 250 ~ 1, เขย่าไปที่ Centrifuge ที่ 9615 กรัมเป็นเวลา 10 วินาทีและทิ้งส่วนที่เหลือไป เม็ดถูกแขวนใหม่ใน 60/1 1 ของเอทานอลสัมบูรณ์และใช้สำหรับ 5 นัด (10 ต่อ 1 ต่อการยิง)

4 การทำงานของปืนยีน

การดำเนินการทั้งหมดของยีนปืนดำเนินการภายใต้สภาวะปลอดเชื้อดังนี้:

1) ฆ่าเชื้อที่ผิวปืนปืนและห้องเก็บตัวอย่างด้วยเอทานอล 70% ในขณะเดียวกันตาข่ายกั้นและแผ่นดิสก์ที่แยกออกได้ตัวพาไมโครยืดหยุ่นตัวยึดและเครื่องมือยึดเปียกโชก 15 นาทีด้วยเอทานอล 70% จากนั้นนำไปวางบนม้านั่งทำความสะอาดให้แห้ง ไดอะแฟรมแบบแยกส่วนฝาครอบแบบคงที่และอุปกรณ์ส่งสัญญาณแบบไมโครยืดหยุ่นสามารถฆ่าเชื้อที่ผิวด้วยเอทานอล 70% และเป่าแห้ง

2) ใส่สไลด์ microparticle ลงในแหวนยึดและเพิ่มส่วนผสมของ DNA และผงทองลงไปที่กึ่งกลางของสไลด์ microparticle และแห้งประมาณ 1 นาที

3) ติดตั้งเมมเบรนที่แตกได้บนตัวยึดแล้วหมุนตามเข็มนาฬิกาไปที่คันเร่งแก๊ส

4) ติดตั้งวงแหวนอวกาศ, ตาข่ายกั้น, ตัวยึดตาข่าย, ตัวยึดอนุภาคและวงแหวนยึด (หน้าที่มีสิ่งที่คว่ำหน้าลง), กระชับฝาครอบและสอดเข้าไปในคว้า

5) วางตัวอย่างในห้องระดมยิงและปิดประตู

6) เปิดวาล์วหลักของถังก๊าซฮีเลียมและหมุนวาล์วควบคุมฮีเลียมตามเข็มนาฬิกาเพื่อให้ตัวชี้วัดของตัวชี้วัดความดันสูงกว่าแรงดันไดอะแฟรม 200Psi (= 1.379MPa)

7) เปิดสวิตช์ยีนปืนและสวิตช์หม้อแปลง

8) กดปุ่มสูญญากาศ เมื่อสูญญากาศเป็น 26-28in Hg (= 88.05 ～ 94.82kPa) ให้กดปุ่ม Hold อย่างรวดเร็วจากนั้นกดปุ่มเปิดใช้งานค้างไว้และเก็บไว้จนกว่าจะเปิดใช้งาน

9) กดปุ่ม vent เพื่อรีเซ็ตตัวอย่างหลังจากตารางสูญญากาศเป็นศูนย์

10) ปิดเครื่อง

ขันสวิทช์หลักของกระบอกสูบฮีเลี่ยมกดปืนเปล่าแล้วคืนพอยน์เตอร์ของเกจวัดความดันเป็นศูนย์จากนั้นหมุนวาล์วปรับมาตรวัดความดันทวนเข็มนาฬิกา; ปิดสวิตช์หลักของปืนยีนและสวิตช์หม้อแปลง